附件：應(yīng)用于結(jié)直腸癌篩查及輔助診斷的糞便多靶點(diǎn)聯(lián)合檢測(cè)試劑非臨床研究審評(píng)要點(diǎn)（2025年第15號(hào)）.doc

應(yīng)用于結(jié)直腸癌篩查及輔助診斷的
糞便多靶點(diǎn)聯(lián)合檢測(cè)試劑
非臨床研究審評(píng)要點(diǎn)

本審評(píng)要點(diǎn)主要針對(duì)糞便多靶點(diǎn)聯(lián)合檢測(cè)試劑的分析性能、陽性判斷值、穩(wěn)定性、主要原材料及生產(chǎn)工藝等研究過程，為體外診斷試劑注冊(cè)申請(qǐng)人和技術(shù)審評(píng)部門提供參考。

本審評(píng)要點(diǎn)是基于特定申報(bào)產(chǎn)品的基因點(diǎn)突變、甲基化及便隱血檢測(cè)試劑的一般要求，注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本審評(píng)要點(diǎn)是供注冊(cè)申請(qǐng)人和技術(shù)審評(píng)人員使用的指導(dǎo)性文件，但不包括審評(píng)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本審評(píng)要點(diǎn)。如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。

本審評(píng)要點(diǎn)是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

本審評(píng)要點(diǎn)適用于采用免疫法和實(shí)時(shí)熒光PCR法，體外定性檢測(cè)人糞便樣本中血紅蛋白聯(lián)合基因點(diǎn)突變和/或基因甲基化的聯(lián)合檢測(cè)試劑。檢測(cè)結(jié)果通過計(jì)算綜合評(píng)分，用于對(duì)結(jié)直腸癌高風(fēng)險(xiǎn)人群的篩查或臨床結(jié)直腸癌疑似患者的輔助診斷。

對(duì)于適用于其他樣本類型，不同檢驗(yàn)原理或組合形式的聯(lián)合檢測(cè)產(chǎn)品，可能部分要求不完全適用或本文所述內(nèi)容不夠全面，申請(qǐng)人可以參照本審評(píng)要點(diǎn)，根據(jù)產(chǎn)品特性對(duì)適用部分進(jìn)行評(píng)價(jià)或補(bǔ)充其他的評(píng)價(jià)資料進(jìn)行相應(yīng)驗(yàn)證。

二、注冊(cè)審查要點(diǎn)

（一）監(jiān)管信息

1.產(chǎn)品名稱及分類編碼

產(chǎn)品名稱應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)與備案管理辦法》及相關(guān)法規(guī)的要求，明確突變基因、甲基化基因、便隱血等檢測(cè)靶標(biāo)。按照《體外診斷試劑分類規(guī)則》，該產(chǎn)品按照第三類體外診斷試劑管理，分類編碼為6840。

2.注冊(cè)申請(qǐng)人還需提交產(chǎn)品列表、關(guān)聯(lián)文件、申報(bào)前與監(jiān)管機(jī)構(gòu)的聯(lián)系情況和溝通記錄及符合性聲明等文件。

（二）綜述資料

內(nèi)容應(yīng)符合《醫(yī)療器械監(jiān)督管理?xiàng)l例》和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》的相關(guān)要求，主要包括概述、產(chǎn)品描述、預(yù)期用途、申報(bào)產(chǎn)品上市歷史及其他需說明的內(nèi)容。建議申請(qǐng)人著重介紹以下幾方面內(nèi)容：

申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)臨床上結(jié)直腸癌篩查與診療的相關(guān)要求，對(duì)高風(fēng)險(xiǎn)人群的選擇提供充分的支持資料，包括診療指南或?qū)＜夜沧R(shí)等。多項(xiàng)標(biāo)志物的選擇及組合應(yīng)具有科學(xué)性和臨床價(jià)值。應(yīng)詳述靶基因、突變位點(diǎn)、甲基化位點(diǎn)的篩選依據(jù)及過程。介紹靶基因、點(diǎn)突變及甲基化的生物學(xué)特征及臨床意義，中國人群點(diǎn)突變頻率，基因甲基化的組織特異性，提供健康人基因甲基化的基線水平等相關(guān)信息，提交文獻(xiàn)依據(jù)。

比較多項(xiàng)標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)與單項(xiàng)標(biāo)志物檢測(cè)的診斷效能差異，還應(yīng)與臨床已有公認(rèn)的篩查方法比較異同，確認(rèn)多項(xiàng)標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)的產(chǎn)品設(shè)計(jì)具有臨床價(jià)值。

產(chǎn)品描述中應(yīng)詳述各靶標(biāo)檢測(cè)原理，引物探針設(shè)計(jì)及其與檢測(cè)位點(diǎn)的對(duì)應(yīng)關(guān)系，內(nèi)標(biāo)選擇與質(zhì)控的設(shè)置，如有防污染措施，需描述防污染的原理。陽性判斷值需計(jì)算后進(jìn)行判讀的產(chǎn)品，應(yīng)詳述計(jì)算原理、系數(shù)選擇和判讀規(guī)則。

（三）非臨床資料

1.產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗(yàn)報(bào)告

1.1 產(chǎn)品技術(shù)要求

申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、前期評(píng)價(jià)等結(jié)果，依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)資料，結(jié)合產(chǎn)品特性按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（2022年第8號(hào)）的要求編寫產(chǎn)品技術(shù)要求。該類產(chǎn)品作為第三類體外診斷試劑，應(yīng)將主要原材料及生產(chǎn)工藝要求等內(nèi)容作為附錄附于產(chǎn)品技術(shù)要求正文后。

如有適用的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，產(chǎn)品技術(shù)要求的相關(guān)要求應(yīng)不低于相應(yīng)的要求。

1.2產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告

根據(jù)《體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》的要求，申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)提供三個(gè)不同生產(chǎn)批次產(chǎn)品的檢驗(yàn)報(bào)告，有適用的國家標(biāo)準(zhǔn)品的，應(yīng)當(dāng)使用國家標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行檢驗(yàn)。報(bào)告形式可為申請(qǐng)人出具的自檢報(bào)告或委托有資質(zhì)的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)出具的檢驗(yàn)報(bào)告。申請(qǐng)人開展自檢的，應(yīng)當(dāng)符合《醫(yī)療器械注冊(cè)自檢管理規(guī)定》及相關(guān)法規(guī)的要求。

2.分析性能評(píng)估

注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在原材料和生產(chǎn)工藝經(jīng)過選擇和確認(rèn)、質(zhì)量管理體系得到有效控制并且保證產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定的基礎(chǔ)上，采用完整、確定的檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行分析性能評(píng)估，包括具體研究方法、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)分析等詳細(xì)資料。對(duì)于本類產(chǎn)品建議著重對(duì)以下分析性能進(jìn)行研究：

如試劑用于不同適用機(jī)型，需要在不同機(jī)型上分別進(jìn)行性能評(píng)估。

當(dāng)產(chǎn)品包含多項(xiàng)被測(cè)物時(shí)，原則上應(yīng)針對(duì)所有被測(cè)物分別進(jìn)行檢測(cè)性能評(píng)價(jià)。如不適用，應(yīng)提供充分的理由和依據(jù)，并采用合理的方法進(jìn)行檢測(cè)性能評(píng)價(jià)。

需多靶標(biāo)綜合判斷陰陽性的產(chǎn)品，除單項(xiàng)被測(cè)物的性能評(píng)價(jià)研究外，還應(yīng)提供綜合檢測(cè)結(jié)果評(píng)價(jià)資料。

分析性能評(píng)估內(nèi)容包括樣本穩(wěn)定性、適用樣本類型、DNA提取/純化性能及甲基化DNA轉(zhuǎn)化性能、準(zhǔn)確度、精密度、檢出限、分析特異性、鉤狀效應(yīng)等研究。

2.1樣本穩(wěn)定性

樣本穩(wěn)定性可包括樣本處理不同階段的樣本穩(wěn)定性研究，一般包括樣本各種實(shí)際運(yùn)輸及儲(chǔ)存（常溫、冷藏和冷凍）條件下的保存期限驗(yàn)證，以確認(rèn)樣本的保存條件及保存時(shí)間?？梢栽诤侠淼臏囟确秶鷥?nèi)，每間隔一定的時(shí)間段即對(duì)儲(chǔ)存樣本進(jìn)行驗(yàn)證，從而確認(rèn)不同類型樣本的穩(wěn)定性?？衫鋬霰４娴臉颖具€應(yīng)對(duì)凍融次數(shù)進(jìn)行合理驗(yàn)證。應(yīng)明確具體的保存溫度范圍。

如核酸提取產(chǎn)物可保存，還需對(duì)核酸提取產(chǎn)物的保存條件和保存時(shí)間進(jìn)行研究。

如甲基化DNA轉(zhuǎn)化后的樣本可保存，需提交轉(zhuǎn)化后的樣本穩(wěn)定性研究資料。

2.2適用樣本類型

產(chǎn)品適用的樣本類型為人糞便樣本。根據(jù)布里斯托（Bristol）大便分類法，糞便樣本分為7個(gè)型別。應(yīng)收集7種型別的糞便樣本，分別對(duì)不同型別的檢出結(jié)果進(jìn)行研究。對(duì)不適用糞便類型應(yīng)在說明書明示。

2.3 DNA提取/純化性能及甲基化DNA轉(zhuǎn)化性能

申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)配套使用的核酸提取/純化方法的提取效率和提取核酸純度、濃度、DNA完整性進(jìn)行評(píng)估，此外需結(jié)合試劑對(duì)檢出限、重復(fù)性、抗干擾性能等進(jìn)行充分的驗(yàn)證。

DNA甲基化檢測(cè)需要針對(duì)不同的樣本類型與檢測(cè)應(yīng)用選擇適宜的轉(zhuǎn)化方法。對(duì)于通過重亞硫酸鹽處理DNA的情形，應(yīng)提交重亞硫酸鹽處理試劑的篩選研究、不同甲基化比例樣本的轉(zhuǎn)化效率研究、DNA的回收效率等性能研究，設(shè)定相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

2.4準(zhǔn)確度

使用經(jīng)確認(rèn)的臨床樣本進(jìn)行檢測(cè)，包括進(jìn)展期腺瘤以及不同分期（I-IV）的結(jié)直腸癌樣本，評(píng)價(jià)申報(bào)產(chǎn)品基因點(diǎn)突變/甲基化檢測(cè)結(jié)果與對(duì)比試劑/方法檢測(cè)結(jié)果的一致性；評(píng)價(jià)申報(bào)產(chǎn)品便隱血檢測(cè)結(jié)果與已上市試劑檢測(cè)結(jié)果的一致性。

針對(duì)所有被測(cè)基因，建議采用境內(nèi)已上市同類產(chǎn)品作為對(duì)比試劑，與之進(jìn)行比較研究。如選擇同類產(chǎn)品，應(yīng)確認(rèn)具有良好的可比性。如該基因點(diǎn)突變/基因甲基化檢測(cè)尚無同類產(chǎn)品上市，可采用適合的基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室參考方法作為對(duì)比方法，例如Sanger測(cè)序法、NGS、數(shù)字PCR等。

需多靶標(biāo)綜合判斷陰陽性的產(chǎn)品，除單項(xiàng)被測(cè)物的準(zhǔn)確度評(píng)價(jià)研究外，還應(yīng)提供綜合檢測(cè)結(jié)果的評(píng)價(jià)資料，可與最終病理結(jié)果比對(duì)。

2.5精密度

使用不同濃度和不同甲基化比例的臨床樣本，采用三批試劑對(duì)可能影響檢測(cè)精密度的主要變量進(jìn)行驗(yàn)證，應(yīng)考慮運(yùn)行、時(shí)間、操作者、儀器、試劑批次和地點(diǎn)等影響精密度的條件，設(shè)計(jì)合理的精密度試驗(yàn)方案進(jìn)行評(píng)價(jià)。精密度評(píng)價(jià)試驗(yàn)應(yīng)包含核酸提取/純化及甲基化DNA轉(zhuǎn)化步驟。

2.6檢出限

在不同DNA濃度下（該背景DNA濃度建議參考患者糞便樣本），對(duì)含有不同比例基因突變、不同比例DNA甲基化的樣本進(jìn)行檢測(cè)，確定樣本的檢出限?？墒褂貌煌珼NA濃度、不同甲基化比例的樣本進(jìn)行研究，采用臨床陰性基質(zhì)進(jìn)行稀釋，每濃度梯度使用三批試劑分別在適用機(jī)型上檢測(cè)至少20次，將檢出率大于等于95%的最低濃度水平確定為檢出限。

研究便隱血檢測(cè)試劑對(duì)低濃度血紅蛋白的陽性檢出率，檢測(cè)至少20次，將檢出率大于等于95%的最低濃度水平確定為檢出限。

也可選用其他合理方法進(jìn)行檢出限的建立。

檢出限的驗(yàn)證可使用三批試劑在適用機(jī)型上對(duì)檢出限濃度水平的臨床樣本檢測(cè)至少20次，陽性檢出率應(yīng)不低于95%。檢出限可表示為xx濃度的野生型DNA背景下*%的基因突變及DNA甲基化。便隱血檢測(cè)試劑的檢出限表示為xx濃度。

2.7分析特異性

2.7.1交叉反應(yīng)

采用靶基因的野生型及其他常見突變的樣本、甲基化靶基因的未甲基化樣本或其他常見位點(diǎn)的甲基化樣本進(jìn)行交叉反應(yīng)研究。便隱血項(xiàng)目應(yīng)考慮血紅蛋白結(jié)構(gòu)類似物對(duì)產(chǎn)品檢測(cè)結(jié)果的影響。

采用其他惡性腫瘤尤其是消化道惡性腫瘤患者（如食道癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、膽管癌等）、消化道良性疾病患者（如炎癥性腸病、消化道潰瘍、結(jié)直腸息肉等）糞便樣本，評(píng)價(jià)對(duì)本試劑檢測(cè)結(jié)果的影響。

2.7.2干擾試驗(yàn)

對(duì)于基因點(diǎn)突變檢測(cè)、基因甲基化檢測(cè)項(xiàng)目，常見內(nèi)源性干擾物質(zhì)包括血紅蛋白、膽紅素、白細(xì)胞、血清蛋白、多糖等；常見外源性干擾物質(zhì)包括維生素C、膳食纖維、消化道疾病常用藥物（通便靈、西咪替丁等H2受體拮抗劑、奧美拉唑等質(zhì)子泵抑制劑、硫糖鋁等胃黏膜保護(hù)劑、乳酸桿菌等胃腸道益生菌、嗎丁啉等促胃腸動(dòng)力藥、胰酶等消化酶補(bǔ)充劑）。

對(duì)于便隱血項(xiàng)目，干擾物質(zhì)包括動(dòng)物血紅蛋白、肌紅蛋白、維生素C等。

2.8便隱血檢測(cè)試劑的鉤狀效應(yīng)

采用不同濃度梯度的人血紅蛋白進(jìn)行檢測(cè)，評(píng)價(jià)一定濃度的人血紅蛋白對(duì)試劑檢測(cè)結(jié)果的影響。當(dāng)出現(xiàn)反應(yīng)強(qiáng)度隨濃度升高反而降低的情況，即為出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)的最低濃度。

2.9反應(yīng)體系

2.9.1基因點(diǎn)突變檢測(cè)、基因甲基化檢測(cè)試劑的反應(yīng)體系，包括核酸提取用樣本體積、洗脫體積、DNA轉(zhuǎn)化用核酸樣本體積、DNA轉(zhuǎn)化條件、反應(yīng)體系中的加樣量（包括采樣次數(shù)及重量）、試劑用量、反應(yīng)體系各成分終濃度(如酶濃度、引物/探針濃度、dNTP濃度、陽離子濃度等)。對(duì)于多重PCR反應(yīng)體系，應(yīng)針對(duì)靶標(biāo)與內(nèi)標(biāo)的擴(kuò)增效率及相互影響進(jìn)行充分研究。

提供PCR反應(yīng)各階段溫度、時(shí)間及循環(huán)數(shù)、熒光采集時(shí)間的研究資料。提供不同機(jī)型基線、閾值、閾值循環(huán)數(shù)（Ct）、熒光強(qiáng)度確定的研究資料。

提供質(zhì)控體系設(shè)置、Ct值確定的研究資料。

不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述，并提交驗(yàn)證資料。

2.9.2便隱血檢測(cè)試劑的反應(yīng)體系研究資料，包括加樣方式、加樣量（包括采樣次數(shù)及重量）、反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度、膜孔徑大?。ɑ蛞菩兴俣龋ㄈ缬校┑葪l件對(duì)產(chǎn)品性能的影響，通過試驗(yàn)確定上述條件的最佳組合。還應(yīng)考慮樣本加樣后觀察時(shí)間對(duì)產(chǎn)品檢測(cè)結(jié)果的影響，通過試驗(yàn)確定最佳的觀察時(shí)間。

3.穩(wěn)定性研究

申報(bào)試劑的穩(wěn)定性主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（有效期）、開瓶穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制（如適用）等研究，申請(qǐng)人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)論。對(duì)于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批產(chǎn)品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

4.陽性判斷值

建議納入一定數(shù)量的臨床樣本，結(jié)合產(chǎn)品特性，可采用受試者工作特征曲線（ROC）或其他合理方法確定靶基因陽性判斷值。采用臨床來源的未經(jīng)治療樣本，根據(jù)預(yù)期用途可納入目標(biāo)癌種、癌前病變、良性疾病、其他惡性腫瘤等樣本進(jìn)行陽性判斷值研究，包括不同病理類型、不同分期、不同突變及甲基化比例等，同時(shí)分期進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

針對(duì)篩查試劑，還應(yīng)納入無腸道相關(guān)癥狀的高危人群樣本，同時(shí)應(yīng)盡量多納入結(jié)直腸癌I期樣本和II期樣本。

提交內(nèi)標(biāo)基因的Ct值確定研究資料，可采用百分位數(shù)法確定內(nèi)標(biāo)基因的Ct值范圍。

申請(qǐng)人應(yīng)詳細(xì)闡述所采用方法的選擇依據(jù)，提交詳細(xì)研究方案、建立和驗(yàn)證設(shè)計(jì)、試驗(yàn)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析過程。明確所用樣本類型、樣本來源、樣本量估算的方法、樣本例數(shù)、臨床背景信息、基因甲基化確認(rèn)過程及數(shù)據(jù)等信息。

結(jié)合便隱血聯(lián)合基因點(diǎn)突變和/或基因甲基化檢測(cè)結(jié)果，以最終病理結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，采用ROC法結(jié)合邏輯回歸模型，建立計(jì)算公式。公式包含全部靶標(biāo)及其對(duì)應(yīng)的不同回歸系數(shù)（權(quán)重）。選擇約登指數(shù)最大值點(diǎn)或者平衡臨床性能最優(yōu)的靈敏度和特異性界值，從而確定試劑的陽性判斷值，即為最終結(jié)果。

5.其他資料

5.1主要原材料

主要原材料研究資料通?？砂ê怂崽崛≡噭?純化試劑、DNA轉(zhuǎn)化試劑、引物、探針、DNA聚合酶、UNG酶（如有）、dNTP、抗體等，此外還包括對(duì)照品/質(zhì)控品及企業(yè)參考品。申請(qǐng)人應(yīng)提交相關(guān)原材料的來源、選擇、制備方法的研究資料，質(zhì)量分析證書，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定和檢驗(yàn)資料。如為申請(qǐng)人自制，應(yīng)提供其詳細(xì)制備過程；如為外購，還應(yīng)提交生產(chǎn)商篩選資料以及生產(chǎn)商提供的原材料質(zhì)量檢定報(bào)告。

5.1.1核酸提取/純化試劑（如有）的主要組成、原理介紹及相關(guān)的驗(yàn)證資料。如產(chǎn)品不包含提取試劑，則需明確配套的核酸提取/純化試劑并提交相應(yīng)的提取效率驗(yàn)證資料。

5.1.2 DNA轉(zhuǎn)化試劑，明確主要組成、原理介紹及相關(guān)的驗(yàn)證資料。如產(chǎn)品不包含DNA轉(zhuǎn)化試劑，則需明確配套的DNA轉(zhuǎn)化試劑并提交相應(yīng)的轉(zhuǎn)化性能驗(yàn)證資料。

5.1.3 引物、探針

申請(qǐng)人應(yīng)詳述點(diǎn)突變、甲基化基因及內(nèi)標(biāo)基因、引物、探針的設(shè)計(jì)原則，擴(kuò)增區(qū)段，檢測(cè)覆蓋的突變、甲基化位點(diǎn)及其所在基因位置并提供選擇依據(jù)，同時(shí)應(yīng)提供引物、探針核酸序列及其對(duì)應(yīng)的檢測(cè)位點(diǎn)的對(duì)應(yīng)關(guān)系。

申請(qǐng)人應(yīng)針對(duì)選定的引物探針原材料進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，一般包括：序列準(zhǔn)確度、純度（HPLC純等）、濃度、探針熒光標(biāo)記基團(tuán)的激發(fā)波長和發(fā)射波長（如適用）以及功能性試驗(yàn)等，明確研究方法并依據(jù)評(píng)價(jià)結(jié)果建立合理的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

5.1.4酶

酶包括DNA聚合酶和/或尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG/UNG）等。申請(qǐng)人應(yīng)針對(duì)各種酶的活性、熱穩(wěn)定性進(jìn)行驗(yàn)證，提交功能性試驗(yàn)資料，并確定酶的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

5.1.5脫氧核糖核苷三磷酸（dNTPs）

包括dATP、dCTP、dGTP、dTTP或dUTP，應(yīng)提交對(duì)其純度、濃度等的驗(yàn)證資料以及功能性試驗(yàn)資料，并確定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

5.1.6對(duì)照品/質(zhì)控品

試劑應(yīng)根據(jù)檢測(cè)原理設(shè)置各種對(duì)照品（質(zhì)控品）來實(shí)現(xiàn)對(duì)產(chǎn)品整個(gè)反應(yīng)體系的有效監(jiān)控。陰性和陽性質(zhì)控品一般為一定濃度的野生和突變位點(diǎn)樣本、甲基化陰性和陽性樣本、便隱血檢測(cè)陰性和陽性樣本。空白對(duì)照為不含靶標(biāo)的溶液。核酸檢測(cè)試劑對(duì)照品應(yīng)參與樣本核酸的平行提取。申請(qǐng)人應(yīng)提供對(duì)照品原料選擇、制備、基因序列確認(rèn)、拷貝數(shù)及濃度確定過程、內(nèi)標(biāo)基因與靶基因的比例確定等的詳細(xì)研究數(shù)據(jù)，并對(duì)其檢測(cè)結(jié)果做出明確的范圍要求。

申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)管內(nèi)抑制導(dǎo)致的假陰性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制，明確所采取的具體措施（如設(shè)置內(nèi)標(biāo)等）、選擇依據(jù)，并提交相應(yīng)研究資料。

5.1.7企業(yè)參考品

提交企業(yè)參考品的研究資料，包括來源、組成、陰陽性和/或量值確認(rèn)等。

企業(yè)參考品可采用臨床樣本或來源于細(xì)胞系的DNA樣本。

需多靶標(biāo)綜合判斷陰陽性的產(chǎn)品，應(yīng)同時(shí)設(shè)置綜合計(jì)算后為陽性及陰性的參考品。

基因點(diǎn)突變陽性參考品包括基因突變?nèi)蹶栃裕ǖ屯蛔冾l率）參考品、基因突變中陽性（中等突變頻率）參考品和基因突變強(qiáng)陽性（較高的突變頻率）參考品，可為一定濃度下糞便樣本DNA和基因突變細(xì)胞系DNA樣本的混合。

基因甲基化陽性參考品包括弱陽性（低甲基化比例）參考品、中陽性（中甲基化比例）參考品和強(qiáng)陽性（較高的甲基化比例）參考品，可為一定濃度下糞便背景DNA含不同比例甲基化基因的樣本。

基因點(diǎn)突變和甲基化的檢出限參考品應(yīng)分別包含全部突變位點(diǎn)、全部甲基化基因位點(diǎn)，應(yīng)設(shè)置檢出限水平濃度的參考品。

精密度參考品可依據(jù)不同反應(yīng)體系，如單獨(dú)檢測(cè)便隱血樣本的反應(yīng)體系，基因點(diǎn)突變和基因甲基化的反應(yīng)體系，分別設(shè)置中、低濃度水平的參考品。

陰性參考品應(yīng)包含易發(fā)生交叉的其他良惡性疾病樣本和干擾物質(zhì)。

便隱血參考品一般包括陽性參考品、陰性參考品、檢出限參考品和精密度參考品，應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品情況進(jìn)行合理設(shè)置。

5.2生產(chǎn)工藝

介紹產(chǎn)品的主要生產(chǎn)工藝，可用流程圖結(jié)合文字的方式表述，提交主要生產(chǎn)工藝的確定及優(yōu)化研究資料。