附件：甲氨蝶呤檢測(cè)試劑注冊(cè)審查指導(dǎo)原則（2023年第22號(hào)）.doc

甲氨蝶呤檢測(cè)試劑注冊(cè)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在為醫(yī)療器械注冊(cè)申請(qǐng)人（以下簡(jiǎn)稱“申請(qǐng)人”）進(jìn)行甲氨蝶呤檢測(cè)試劑的注冊(cè)申報(bào)提供技術(shù)指導(dǎo)，同時(shí)也為醫(yī)療器械監(jiān)督管理部門對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的審評(píng)提供技術(shù)參考。

本指導(dǎo)原則是對(duì)該類試劑注冊(cè)申報(bào)資料的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。如申請(qǐng)人認(rèn)為有必要增加本指導(dǎo)原則不包含的研究?jī)?nèi)容，可自行補(bǔ)充。

本指導(dǎo)原則是供申請(qǐng)人和技術(shù)審評(píng)人員使用的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊(cè)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。需在遵循相關(guān)法規(guī)和強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

本指導(dǎo)原則適用于以化學(xué)發(fā)光法、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、均相酶免疫等方法對(duì)人體血清/血漿中甲氨蝶呤進(jìn)行定量檢測(cè)的體外診斷試劑。其他方法學(xué)的甲氨蝶呤檢測(cè)試劑注冊(cè)可參照本指導(dǎo)原則，但應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用。

二、注冊(cè)審查要點(diǎn)

（一）監(jiān)管信息

1.申請(qǐng)表

申請(qǐng)人應(yīng)按照填表要求填寫。

2.產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品的命名應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)與備案管理辦法》要求。產(chǎn)品名稱一般由三部分組成，第一部分：被測(cè)物名稱為甲氨蝶呤；第二部分：用途，如測(cè)定試劑或檢測(cè)試劑；第三部分：方法或者原理，如化學(xué)發(fā)光法、均相酶免疫、酶聯(lián)免疫法、熒光免疫層析法等。

3.分類編碼

根據(jù)《體外診斷試劑分類子目錄》，甲氨蝶呤檢測(cè)試劑管理類別為Ⅱ類，分類編碼為6840。

4.既往溝通記錄

在產(chǎn)品申報(bào)前，如果申請(qǐng)人與監(jiān)管機(jī)構(gòu)針對(duì)申報(bào)產(chǎn)品以會(huì)議形式進(jìn)行了溝通，或者申報(bào)產(chǎn)品與既往注冊(cè)申報(bào)相關(guān)，應(yīng)提交相關(guān)溝通記錄。

5.主文檔授權(quán)信

如適用，申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)對(duì)主文檔引用的情況進(jìn)行說(shuō)明。申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)提交由主文檔所有者或其備案代理機(jī)構(gòu)出具的授權(quán)申請(qǐng)人引用主文檔信息的授權(quán)信。授權(quán)信中應(yīng)當(dāng)包括引用主文檔的申請(qǐng)人信息、產(chǎn)品名稱、已備案的主文檔編號(hào)、授權(quán)引用的主文檔頁(yè)碼/章節(jié)信息等內(nèi)容。

（二）綜述資料

綜述資料主要包括技術(shù)原理、主要生產(chǎn)工藝、包裝描述、研發(fā)歷程、預(yù)期用途、預(yù)期使用環(huán)境、臨床適應(yīng)證、不良事件情況等內(nèi)容，應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)與備案管理辦法》和《醫(yī)療器械注冊(cè)申報(bào)資料和批準(zhǔn)證明文件格式要求（體外診斷試劑）》的相關(guān)要求。

（三）非臨床資料

1.產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)管理資料

申請(qǐng)人應(yīng)考慮產(chǎn)品壽命周期的各個(gè)環(huán)節(jié)，從預(yù)期用途、可能的使用錯(cuò)誤、與安全性有關(guān)的特征、已知及可預(yù)見(jiàn)的危害等方面的判定以及對(duì)患者風(fēng)險(xiǎn)的估計(jì)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析，應(yīng)符合GB/T 42062《醫(yī)療器械風(fēng)險(xiǎn)管理對(duì)醫(yī)療器械的應(yīng)用》的要求。

無(wú)法正確進(jìn)行測(cè)試或結(jié)果解釋存在錯(cuò)誤可能對(duì)患者造成不當(dāng)管理風(fēng)險(xiǎn)。甲氨蝶呤安全范圍窄、服藥個(gè)體化差異大、具有細(xì)胞毒性，不良反應(yīng)較多，低于有效血藥濃度無(wú)法抑制腫瘤生長(zhǎng)，高于其有效血藥濃度則會(huì)引起胃腸道反應(yīng)、肝硬化、腎臟損害等副作用及不良反應(yīng)。因此對(duì)攝入甲氨蝶呤的患者進(jìn)行血藥濃度監(jiān)測(cè)對(duì)減少不良反應(yīng)及指導(dǎo)臨床個(gè)體化安全用藥具有重要的意義。

進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析時(shí)，應(yīng)識(shí)別出產(chǎn)品的其它特定風(fēng)險(xiǎn)，并對(duì)風(fēng)險(xiǎn)分析方法進(jìn)行描述。如果可以選擇使用其它方法來(lái)解決所識(shí)別出的特定風(fēng)險(xiǎn)，或已識(shí)別出不同于本指南中風(fēng)險(xiǎn)的其它風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)提供詳細(xì)信息來(lái)支持所采用的、解決該風(fēng)險(xiǎn)的方法。

2.體外診斷試劑安全和性能基本原則清單

說(shuō)明產(chǎn)品符合《體外診斷試劑安全和性能基本原則清單》各項(xiàng)適用要求所采用的方法，以及證明其符合性的文件。對(duì)于其中不適用的各項(xiàng)要求，應(yīng)當(dāng)說(shuō)明理由。

3.產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗(yàn)報(bào)告

    3.1產(chǎn)品技術(shù)要求

產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)按照《體外診斷試劑注冊(cè)與備案管理辦法》和編制要求的相關(guān)規(guī)定進(jìn)行編寫。同時(shí)結(jié)合產(chǎn)品具體適用的指導(dǎo)原則或相關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)以及產(chǎn)品的特點(diǎn)，明確保證產(chǎn)品安全、有效、質(zhì)量可控的各項(xiàng)性能指標(biāo)和檢驗(yàn)方法。

3.2主要性能指標(biāo)

該產(chǎn)品作為定量檢測(cè)試劑主要包括以下性能指標(biāo)：試劑的外觀、裝量(如適用)、空白限（如適用）、檢出限、正確度、線性區(qū)間、精密度、特異性等；如注冊(cè)單元中包含校準(zhǔn)品或質(zhì)控品，其性能指標(biāo)和檢驗(yàn)方法應(yīng)在技術(shù)要求中予以描述，如：外觀、裝量（如適用）、均勻性、預(yù)期結(jié)果等。不同方法學(xué)的產(chǎn)品應(yīng)根據(jù)方法學(xué)特點(diǎn)制訂不同的性能指標(biāo)。

3.3產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告

在保證產(chǎn)品原材料和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定可靠的基礎(chǔ)上，采用在符合醫(yī)療器械質(zhì)量管理體系相關(guān)要求的條件下生產(chǎn)的產(chǎn)品進(jìn)行檢驗(yàn)。有適用的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品的，應(yīng)當(dāng)使用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行檢驗(yàn)?？商峤灰韵氯我恍问降臋z驗(yàn)報(bào)告：

3.3.1申請(qǐng)人出具的自檢報(bào)告。

3.3.2委托有資質(zhì)的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)出具的檢驗(yàn)報(bào)告。

如產(chǎn)品提交自檢報(bào)告，還需按照《醫(yī)療器械注冊(cè)自檢管理規(guī)定》的要求提交相應(yīng)資料。

4.分析性能研究

定量檢測(cè)體外診斷試劑的分析性能一般包括正確度，精密度，包容性，空白限、檢出限及定量限，分析特異性，高劑量鉤狀效應(yīng)，測(cè)量區(qū)間及可報(bào)告區(qū)間，適用的樣本類型等。產(chǎn)品的準(zhǔn)確度（accuracy）與正確度和精密度有關(guān)。申請(qǐng)人應(yīng)設(shè)計(jì)合理的試驗(yàn)方案，對(duì)各項(xiàng)分析性能進(jìn)行充分評(píng)估。

4.1一般研究建議

由于患者樣本能真實(shí)反映游離藥物和結(jié)合藥物、代謝產(chǎn)物以及其他合并服用的藥物對(duì)產(chǎn)品檢測(cè)結(jié)果的影響，性能評(píng)估（如樣本穩(wěn)定性，線性區(qū)間，空白限、檢出限及定量限，精密度，正確度等）時(shí)應(yīng)盡可能納入預(yù)期使用人群（即攝入甲氨蝶呤的患者）的樣本進(jìn)行評(píng)價(jià)。確需使用加標(biāo)樣本進(jìn)行研究時(shí)，應(yīng)提供關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)品純度、代謝產(chǎn)物或潛在干擾物質(zhì)、樣品類型的信息等。添加分析物時(shí)，加入體積應(yīng)盡可能少（原則上少于總體積的10%）；添加干擾/交叉物質(zhì)時(shí)，應(yīng)盡量使用接近體內(nèi)循環(huán)形式的樣品（加入體積不超過(guò)5%）或純品。還應(yīng)確保在每項(xiàng)分析中都包含所有的分析步驟。

一般應(yīng)有研究方案和研究報(bào)告，清晰描述研究目的、試驗(yàn)地點(diǎn)和方法，試驗(yàn)采用的具體試劑名稱、規(guī)格和批次、儀器名稱和型號(hào)，樣本類型、來(lái)源、處理方法、基質(zhì)類型及背景信息等，體現(xiàn)結(jié)果數(shù)據(jù)和數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析過(guò)程及結(jié)果。

分析性能評(píng)估的結(jié)果應(yīng)在產(chǎn)品說(shuō)明書中進(jìn)行描述，合理聲稱產(chǎn)品性能。

4.2對(duì)于本試劑，建議著重對(duì)以下性能進(jìn)行研究

4.2.1樣本穩(wěn)定性

應(yīng)充分考慮實(shí)際使用過(guò)程中樣本采集、處理、運(yùn)輸及保存等各個(gè)階段的條件，對(duì)不同類型樣本的穩(wěn)定性分別進(jìn)行評(píng)價(jià)并提交研究資料。內(nèi)容包括建議的保存條件、添加劑（如抗凝劑）和運(yùn)輸條件（如涉及）等。樣本穩(wěn)定性內(nèi)容的研究結(jié)果應(yīng)在說(shuō)明書【樣本要求】中進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。

4.2.2適用的樣本類型

目前該產(chǎn)品臨床應(yīng)用指南推薦的樣本類型為血清或血漿樣本。

4.2.3校準(zhǔn)品的量值溯源和質(zhì)控品的賦值

應(yīng)明確申報(bào)產(chǎn)品配套的校準(zhǔn)品和質(zhì)控品。提供試劑配套校準(zhǔn)品量值溯源相關(guān)資料，提供質(zhì)控品賦值及其質(zhì)控范圍確定的相關(guān)資料（應(yīng)當(dāng)提交在所有適用機(jī)型上進(jìn)行賦值或驗(yàn)證的資料）。同時(shí)，至少應(yīng)對(duì)校準(zhǔn)品的正確度、質(zhì)控品的可接受區(qū)間/值（預(yù)期結(jié)果）以及校準(zhǔn)品/質(zhì)控品的均勻性進(jìn)行性能評(píng)估。如校準(zhǔn)品/質(zhì)控品的基質(zhì)不同于臨床常用樣本類型，還應(yīng)提交基質(zhì)效應(yīng)研究資料。

4.2.4正確度

正確度由系統(tǒng)測(cè)量誤差決定，通常用偏倚表示。根據(jù)檢測(cè)試劑的實(shí)際情況，參考物質(zhì)、比較測(cè)量程序等的可獲得性，申請(qǐng)人可選擇下述方法進(jìn)行正確度評(píng)價(jià)。應(yīng)提供正確度評(píng)價(jià)用物質(zhì)或比較測(cè)量程序的基本信息和選擇依據(jù)。

4.2.4.1使用參考物質(zhì)的正確度評(píng)價(jià)。

推薦的參考物質(zhì)包括：具有互換性的有證參考物質(zhì)，公認(rèn)的參考品、標(biāo)準(zhǔn)品，參考測(cè)量程序賦值的臨床樣本。一般情況下，建議采用2～3個(gè)水平的參考物質(zhì)，代表試劑測(cè)量區(qū)間內(nèi)的高、低濃度。進(jìn)行多次重復(fù)檢測(cè)，采用檢測(cè)結(jié)果平均值與參考量值計(jì)算偏倚。

4.2.4.2回收試驗(yàn)

該產(chǎn)品有國(guó)家/國(guó)際藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，可采用回收試驗(yàn)進(jìn)行正確度評(píng)價(jià)。將標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或分析物純品（純度為：98%-102%）加入臨床樣本中，配制成回收樣品，進(jìn)行檢測(cè)。

檢測(cè)至少三個(gè)水平的回收樣品，代表試劑測(cè)量范圍的高、中、低濃度。每個(gè)濃度重復(fù)檢測(cè)（重復(fù)測(cè)試次數(shù)不小于3），采用檢測(cè)結(jié)果平均值計(jì)算回收率。

4.2.4.3方法學(xué)比對(duì)

采用申報(bào)試劑與合理的比較測(cè)量程序同時(shí)檢測(cè)臨床樣本，通過(guò)兩者的比對(duì)研究和偏倚估計(jì)，進(jìn)行申報(bào)試劑的正確度評(píng)價(jià)。比較測(cè)量程序可選擇參考測(cè)量程序或同類試劑。臨床樣本的濃度水平應(yīng)覆蓋申報(bào)試劑的測(cè)量區(qū)間。在性能建立時(shí)，建議對(duì)每個(gè)樣本重復(fù)檢測(cè)，以平均值或中位數(shù)進(jìn)行回歸分析。

4.2.5精密度

應(yīng)對(duì)精密度指標(biāo)，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)等的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求。應(yīng)考慮樣本類型、時(shí)間、操作者、儀器、試劑批次和地點(diǎn)等影響精密度的條件，設(shè)計(jì)合理的精密度試驗(yàn)方案進(jìn)行評(píng)價(jià)。設(shè)定合理的精密度評(píng)價(jià)周期，例如為期至少20天的檢測(cè)。對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，獲得實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度、實(shí)驗(yàn)室間精密度、批間精密度等結(jié)果。建議對(duì)檢測(cè)范圍內(nèi)低、中、高至少3個(gè)濃度水平的精密度進(jìn)行評(píng)估。3個(gè)濃度分別為（a）接近治療效果不佳范圍或可報(bào)告范圍下限，（b）在治療范圍內(nèi)的濃度，以及（c）接近可報(bào)告范圍上限或毒性范圍的濃度。精密度研究可能涉及多天、多地點(diǎn)檢測(cè)，應(yīng)確保樣本的穩(wěn)定性和一致性，可將樣本等分保存。  

4.2.6空白限、檢出限及定量限

定量檢測(cè)體外診斷試劑對(duì)樣本濃度下限的檢出能力指標(biāo)包括空白限（LoB）、檢出限（LoD）及定量限（LoQ）。申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的具體情況選擇適用的方法進(jìn)行檢出能力的研究，如產(chǎn)品不適用于LoB、LoD和LoQ的概念，應(yīng)提供充分說(shuō)明。

4.2.6.1空白限、檢出限與定量限的建立

LoB，LoD，LoQ的建立需分別選擇多個(gè)獨(dú)立的樣本（空白樣本、低濃度水平樣本、已知濃度的低水平樣本），在多天內(nèi)進(jìn)行研究。

LoB一般由多個(gè)獨(dú)立的空白樣本（無(wú)分析物）的檢測(cè)結(jié)果計(jì)算獲得；LoD一般由多個(gè)獨(dú)立的低濃度（含有分析物）樣本的檢測(cè)結(jié)果，結(jié)合LoB進(jìn)行計(jì)算獲得。應(yīng)根據(jù)具體產(chǎn)品的原理、檢測(cè)結(jié)果差異和數(shù)據(jù)分布，選擇合理的試驗(yàn)方案和統(tǒng)計(jì)分析方法。對(duì)于空白樣本檢測(cè)結(jié)果為零，可采用對(duì)多個(gè)已知分析物濃度的樣本進(jìn)行系列稀釋后重復(fù)檢測(cè)獲得LoD。

LoQ應(yīng)滿足預(yù)設(shè)準(zhǔn)確度指標(biāo)，即考慮偏倚和精密度的要求。偏倚可通過(guò)檢測(cè)具有可接受參考量值的樣本進(jìn)行評(píng)估，所以需獲得已知濃度的低水平樣本。如涉及將樣本稀釋至低濃度水平，應(yīng)確保稀釋液不引起明顯的基質(zhì)效應(yīng)，且在低濃度區(qū)間呈線性。精密度的評(píng)估可根據(jù)檢測(cè)試劑及其應(yīng)用確定其測(cè)量條件，一般應(yīng)至少包括重復(fù)性和日間精密度。

在某些情況下，如無(wú)法在合適的低水平分析物濃度下確定偏倚，可采用其他合理的替代方法評(píng)估LoQ，例如研究試劑精密度達(dá)到特定要求時(shí)的最低分析物濃度。建議僅在無(wú)法確定偏倚時(shí)采用替代方法，并且應(yīng)設(shè)置較為嚴(yán)格的精密度要求。

4.2.6.2空白限、檢出限與定量限的驗(yàn)證

LoB，LoD，LoQ的驗(yàn)證需各選擇至少2個(gè)樣本（空白樣本、檢出限濃度樣本、定量限濃度樣本），在多天內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)。每個(gè)試劑批次至少需要獲得20個(gè)檢測(cè)結(jié)果，計(jì)算符合要求的檢測(cè)結(jié)果比例，如果比例符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求/預(yù)設(shè)的臨界值，則4.2.6.1建立的LoB，LoD，LoQ得到驗(yàn)證。一般來(lái)講，LoB總是低于LoD，而LoD則低于或等于LoQ。

4.2.7分析特異性

應(yīng)評(píng)估分析待測(cè)樣本中和試劑使用過(guò)程中潛在的交叉反應(yīng)和干擾物質(zhì)，并對(duì)干擾和交叉的程度進(jìn)行量化。

4.2.7.1交叉反應(yīng)研究

交叉反應(yīng)研究涉及將各物質(zhì)加標(biāo)到不含藥物的樣本中，對(duì)加標(biāo)樣品的重復(fù)性進(jìn)行評(píng)估并對(duì)所用代謝物的濃度進(jìn)行描述。交叉反應(yīng)應(yīng)當(dāng)考慮結(jié)構(gòu)類似物、合并用藥及主要代謝物的情況，盡可能對(duì)以下物質(zhì)進(jìn)行研究。

4.2.7.1.1結(jié)構(gòu)類似物：葉酸、四氫葉酸、5-甲基四氫葉酸。

4.2.7.1.2合并用藥：6-巰基嘌呤、環(huán)磷酰胺、阿霉素、5-氟尿嘧啶、長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、甲基葉酸、異環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷、鉑類化合物、艾拉莫德、來(lái)氟米特、阿達(dá)木單抗、亞葉酸鈣、保泰松、磺胺類藥物。

4.2.7.1.3主要代謝物：7-羥基甲氨蝶呤、４-氨基-４-脫氧-Ｎ-10-甲基蝶酸、2，4-二氨基甲基蝶酸。

4.2.7.2干擾物質(zhì)研究

干擾物質(zhì)研究應(yīng)當(dāng)考慮常見(jiàn)的內(nèi)源性干擾、外源性干擾和已有報(bào)道的干擾物質(zhì)等對(duì)產(chǎn)品檢測(cè)結(jié)果的影響。

該類產(chǎn)品常見(jiàn)的干擾物包括但不限于以下物質(zhì)：

4.2.7.2.1常見(jiàn)的內(nèi)源性干擾物質(zhì)包括膽紅素、甘油三酯、膽固醇、尿酸、葉酸及其代謝物、類風(fēng)濕因子、嘌呤、血紅蛋白、白蛋白、人抗鼠抗體等。

4.2.7.2.2常見(jiàn)的外源性干擾物質(zhì)包括：樣本添加劑（包括抗凝劑，促凝劑）等。

4.2.8高劑量鉤狀效應(yīng)（如適用）

一些免疫測(cè)定方法可能表現(xiàn)出“高劑量鉤狀效應(yīng)”，即在高濃度時(shí)，待測(cè)物濃度與響應(yīng)度呈現(xiàn)出與校準(zhǔn)曲線相反的數(shù)量關(guān)系。在適用情況下（例如，雙位點(diǎn)或夾心免疫測(cè)定法），應(yīng)將線性區(qū)間研究擴(kuò)展到可報(bào)告區(qū)間之外，達(dá)到可能在臨床條件下出現(xiàn)的最高濃度，以評(píng)估該試劑是否存在高劑量鉤狀效應(yīng)并提交研究資料。

4.2.9線性區(qū)間與可報(bào)告區(qū)間

4.2.9.1線性區(qū)間及測(cè)量區(qū)間

線性區(qū)間的研究，需采用高值和零濃度/低值樣本配制一系列不同濃度的樣本。當(dāng)建立試劑的線性區(qū)間時(shí)，需配制較預(yù)期線性區(qū)間更寬的9個(gè)左右不同濃度的樣本（不包括零濃度樣本），每個(gè)樣本進(jìn)行多次重復(fù)檢測(cè)，根據(jù)可接受線性偏差和各濃度的重復(fù)性，確定檢測(cè)次數(shù)。采用重復(fù)檢測(cè)均值和預(yù)期值進(jìn)行直線回歸分析，建議采用加權(quán)最小二乘回歸等分析方法，提供散點(diǎn)圖、線性回歸方程、線性相關(guān)系數(shù)（r）及線性偏差，判斷結(jié)果是否滿足可接受標(biāo)準(zhǔn)。

當(dāng)驗(yàn)證試劑的線性區(qū)間時(shí)，需配制覆蓋整個(gè)線性區(qū)間的至少5個(gè)不同濃度的樣本，每個(gè)樣本至少重復(fù)檢測(cè)2次。

測(cè)量區(qū)間，也稱分析測(cè)量區(qū)間，在該區(qū)間內(nèi)，臨床樣本在未經(jīng)稀釋、濃縮，或非常規(guī)測(cè)量程序中步驟的其他前處理情況下，檢測(cè)結(jié)果的線性偏差、不精密度和偏倚均在可接受范圍內(nèi)。

4.2.9.2擴(kuò)展測(cè)量區(qū)間和可報(bào)告區(qū)間

如對(duì)超出測(cè)量區(qū)間濃度的樣本可進(jìn)行稀釋后檢測(cè)，應(yīng)研究合適的稀釋液和稀釋倍數(shù)，從而確定試劑的擴(kuò)展測(cè)量區(qū)間和可報(bào)告區(qū)間。兩者上限均為測(cè)量區(qū)間上限×稀釋倍數(shù)，擴(kuò)展測(cè)量區(qū)間的下限為測(cè)量區(qū)間上限。應(yīng)根據(jù)預(yù)期的臨床意義設(shè)置合適的可報(bào)告區(qū)間，并在說(shuō)明書中進(jìn)行提示。如用于大劑量甲氨蝶呤治療結(jié)束后濃度監(jiān)測(cè)，可報(bào)告區(qū)間應(yīng)至少包含0.1μmol/L-10μmol/L；如用于大劑量甲氨蝶呤治療期間濃度監(jiān)測(cè)，可報(bào)告區(qū)間應(yīng)至少包含0.1μmol/L-40μmol/L區(qū)間。

4.2.10適用的樣本類型

如果試劑適用于多種樣本類型（包括抗凝劑），應(yīng)采用合理方法評(píng)價(jià)每種樣本類型的適用性。對(duì)具有可比性的樣本類型，可選擇具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義數(shù)量的樣本進(jìn)行樣本一致性的同源比對(duì)研究；對(duì)于不具有可比性的樣本類型，應(yīng)對(duì)每種樣本類型分別進(jìn)行分析性能評(píng)估。

如果樣本的采集、處理方式存在差別，應(yīng)分析這些差別的潛在影響，并進(jìn)行針對(duì)性的分析性能驗(yàn)證。

4.2.11反應(yīng)體系

本產(chǎn)品注冊(cè)申報(bào)時(shí)無(wú)需提交；由申請(qǐng)人保存，技術(shù)審評(píng)需要時(shí)應(yīng)提交。

反應(yīng)體系研究資料包括樣本的制備方式（采集和處理）、樣本要求、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、校準(zhǔn)方法（如有）、質(zhì)控方法、結(jié)果判讀方式等。

5.穩(wěn)定性研究

一般應(yīng)包含研究方案、報(bào)告和數(shù)據(jù)。

5.1實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（貨架有效期）

提交至少三批申報(bào)產(chǎn)品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究資料。明確儲(chǔ)存的環(huán)境條件（如溫度、濕度和光照）及有效期。

5.2使用穩(wěn)定性

提交申報(bào)產(chǎn)品實(shí)際使用期間穩(wěn)定性的研究資料，應(yīng)包括所有組成成分的開封穩(wěn)定性。適用時(shí)提交復(fù)溶穩(wěn)定性、機(jī)載穩(wěn)定性及凍融次數(shù)研究資料等。如涉及校準(zhǔn)品，還應(yīng)提交校準(zhǔn)頻率或校準(zhǔn)穩(wěn)定性研究資料。明確產(chǎn)品使用的溫度、濕度條件等。

5.3運(yùn)輸穩(wěn)定性

提交申報(bào)產(chǎn)品可在特定或者預(yù)期的條件下運(yùn)輸?shù)难芯抠Y料，應(yīng)說(shuō)明產(chǎn)品正確運(yùn)輸?shù)沫h(huán)境條件（如溫度、濕度、光照和機(jī)械保護(hù)等）。同時(shí)說(shuō)明產(chǎn)品的包裝方式以及暴露的最差運(yùn)輸條件。

試劑穩(wěn)定性內(nèi)容的研究結(jié)果應(yīng)在說(shuō)明書【儲(chǔ)存條件及有效期】中進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。

6.參考區(qū)間

對(duì)于正常未使用相應(yīng)藥物的人群樣本中無(wú)可檢出的特定藥物及其代謝產(chǎn)物，因此此類試劑不涉及參考區(qū)間的內(nèi)容。

甲氨蝶呤的臨床使用一般包括常規(guī)劑量用藥、大劑量甲氨蝶呤（即：靜脈輸注劑量＞500mg/m2）用藥。藥物在人體內(nèi)的濃度隨時(shí)間而變化，因此，不同采血時(shí)間點(diǎn)收集的樣本，血藥濃度檢測(cè)結(jié)果存在較大差異。此外，應(yīng)用大劑量甲氨蝶呤治療惡性腫瘤時(shí)，因用藥方案（例如：靜脈滴注的持續(xù)時(shí)間）的不同，臨床上在不同給藥方案、同一采血時(shí)間下收集的樣本，甲氨蝶呤濃度也存在較大差異。臨床狀態(tài)復(fù)雜程度、個(gè)體對(duì)于甲氨蝶呤的要求不同。因此，不推薦將個(gè)體的數(shù)值作為變更治療方案的唯一指標(biāo)，并且，在改變治療方案前，應(yīng)對(duì)每名患者進(jìn)行充分的臨床評(píng)估并根據(jù)臨床經(jīng)驗(yàn)來(lái)確立自己的區(qū)間。

7.其他資料

7.1三批產(chǎn)品的生產(chǎn)及自檢記錄。

7.2證明產(chǎn)品安全性、有效性的其他非臨床研究資料。

（四）臨床評(píng)價(jià)資料

甲氨蝶呤測(cè)定試劑已經(jīng)列入《關(guān)于發(fā)布免于臨床試驗(yàn)體外診斷試劑目錄的通告》免于進(jìn)行臨床試驗(yàn)的體外診斷試劑目錄中。根據(jù)體外診斷試劑臨床評(píng)價(jià)的相關(guān)要求，申請(qǐng)人可按照《免于臨床試驗(yàn)的體外診斷試劑臨床評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則》要求進(jìn)行臨床評(píng)價(jià)。

申請(qǐng)人也可通過(guò)臨床試驗(yàn)的方式進(jìn)行產(chǎn)品的臨床評(píng)價(jià)，臨床試驗(yàn)的倫理、方案的制定以及報(bào)告的撰寫等臨床試驗(yàn)資料均應(yīng)符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》對(duì)臨床評(píng)價(jià)資料的規(guī)定。

下面僅對(duì)臨床評(píng)價(jià)中的重點(diǎn)問(wèn)題進(jìn)行闡述。

1.樣本要求

應(yīng)選擇濃度覆蓋線性/測(cè)量區(qū)間的預(yù)期適用人群樣本和干擾樣本進(jìn)行研究，并注意醫(yī)學(xué)決定水平和測(cè)量區(qū)間內(nèi)的各個(gè)濃度水平均應(yīng)包含一定數(shù)量的樣本。

樣本采集方式及穩(wěn)定性應(yīng)符合待評(píng)價(jià)試劑和對(duì)比試劑說(shuō)明書有關(guān)要求。原則上，應(yīng)采用臨床真實(shí)樣本進(jìn)行研究。當(dāng)真實(shí)樣本濃度無(wú)法覆蓋檢測(cè)范圍時(shí)，應(yīng)充分闡述無(wú)法獲得的依據(jù)，可適當(dāng)采用稀釋或者經(jīng)處理去除分析物獲得低濃度樣本、添加分析物獲得高濃度樣本等人工制備樣本。人工制備樣本應(yīng)充分考慮樣本的背景信息，基質(zhì)效應(yīng)等影響因素。

充分考慮不同治療方案人群選擇、地域選擇、年齡范圍、給藥后的時(shí)間和抽血時(shí)間等與給藥相關(guān)的因素等內(nèi)容，樣本應(yīng)能夠充分評(píng)價(jià)產(chǎn)品臨床使用的安全性、有效性。

2.方法學(xué)比對(duì)

2.1與已上市同類試劑的比對(duì)：

應(yīng)選擇與境內(nèi)已上市同類產(chǎn)品（對(duì)比試劑）進(jìn)行比較研究，評(píng)價(jià)兩種方法檢測(cè)結(jié)果的一致性。對(duì)比試劑在預(yù)期用途、適用人群、檢測(cè)方法學(xué)、檢測(cè)性能等方面應(yīng)與試驗(yàn)體外診斷試劑具有較好的可比性。

2.2與參考方法的比對(duì)：

鑒于與已上市同類試劑的比對(duì)所能提供的性能信息較為有限，且抗體對(duì)待檢藥物/化合物的反應(yīng)性不同，以及考慮到交叉反應(yīng)等因素，可采用與有資質(zhì)的參考實(shí)驗(yàn)室提供的具有完善的質(zhì)量控制體系的同位素稀釋液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法和隨訪信息在內(nèi)的臨床信息等進(jìn)行比對(duì)，驗(yàn)證產(chǎn)品的分析準(zhǔn)確度。

3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

在完成數(shù)據(jù)收集后，應(yīng)先繪制散點(diǎn)圖和差異圖，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和審查，觀察數(shù)據(jù)是否覆蓋了線性/測(cè)量區(qū)間以及是否存在離群值，并初步了解待評(píng)價(jià)試劑和對(duì)比試劑測(cè)量值之間的潛在變異特征，確定如何更好地表征這些差異。

然后根據(jù)散點(diǎn)圖和差異圖判斷數(shù)據(jù)是否滿足相應(yīng)的假設(shè)前提，并據(jù)此確定最佳的回歸分析方法。常見(jiàn)的回歸分析方法包括Deming回歸、Passing-Bablok回歸分析和最小二乘回歸等，并對(duì)其進(jìn)行假設(shè)檢驗(yàn)以評(píng)價(jià)二者偏倚。

（五）產(chǎn)品說(shuō)明書和標(biāo)簽樣稿

說(shuō)明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、檢驗(yàn)原理、檢驗(yàn)方法、樣本要求、檢測(cè)結(jié)果的解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息，是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)。藥物檢測(cè)試劑通常用于藥物的濃度檢測(cè)，從而指導(dǎo)臨床用藥，鑒于其預(yù)期用途的特殊性，說(shuō)明書中對(duì)預(yù)期用途的準(zhǔn)確描述、對(duì)樣本要求與采集、檢驗(yàn)結(jié)果的解釋、檢驗(yàn)方法的局限性、注意事項(xiàng)等內(nèi)容的解釋尤為重要，有助于使用者正確使用試劑，正確解讀結(jié)果。

產(chǎn)品說(shuō)明書是體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)最重要的文件之一。產(chǎn)品說(shuō)明書的格式應(yīng)符合《醫(yī)療器械說(shuō)明書和標(biāo)簽管理規(guī)定》《體外診斷試劑說(shuō)明書編寫指導(dǎo)原則》的要求。產(chǎn)品說(shuō)明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請(qǐng)人提交的注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對(duì)此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明參考文獻(xiàn)的相關(guān)信息。

以下內(nèi)容僅對(duì)甲氨蝶呤測(cè)定試劑說(shuō)明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，說(shuō)明書其他內(nèi)容應(yīng)根據(jù)《體外診斷試劑說(shuō)明書編寫指導(dǎo)原則》要求進(jìn)行編寫。

1.【產(chǎn)品名稱】

試劑名稱由三部分組成：被測(cè)物名稱、用途、方法或原理。例如：甲氨蝶呤測(cè)定試劑盒（熒光免疫層析法）等。

2.【預(yù)期用途】

說(shuō)明試劑（盒）用于體外定量測(cè)定人體血清或血漿中甲氨蝶呤的含量，適用的樣本類型應(yīng)結(jié)合實(shí)際的臨床研究情況進(jìn)行確認(rèn)。

應(yīng)闡述與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)證及背景情況，說(shuō)明相關(guān)的臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷方法等。

3.【檢驗(yàn)原理】

根據(jù)不同方法學(xué)產(chǎn)品的設(shè)計(jì)原理，詳細(xì)說(shuō)明檢驗(yàn)原理、方法，必要時(shí)可采用圖示方法描述。

4.【主要組成成分】

應(yīng)明確以下內(nèi)容：

4.1試劑盒提供的試劑組分的名稱、比例或濃度，各組分是否可以互換；如含有校準(zhǔn)品或質(zhì)控品，除明確組成成分及生物學(xué)來(lái)源外，校準(zhǔn)品還應(yīng)明確其定值及溯源性，溯源性應(yīng)寫明溯源的最高級(jí)別，包括標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或參考物的編號(hào)，質(zhì)控品應(yīng)明確靶值范圍。

4.2對(duì)于非試劑組分，如試驗(yàn)用耗材（如塑料滴管）、定值單（靶值單）、校準(zhǔn)卡等，應(yīng)注明相關(guān)信息。

4.3對(duì)于試劑盒中不包含，但對(duì)檢驗(yàn)必需的試劑組分，應(yīng)列出此類試劑的名稱、純度、配制方法及其他相關(guān)信息。

4.4對(duì)于液質(zhì)聯(lián)用類方法，其主要組成成分建議包含流動(dòng)相、內(nèi)標(biāo)校準(zhǔn)品（如使用內(nèi)標(biāo)定量）、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、樣本提取劑等。

5.【儲(chǔ)存條件及有效期】

應(yīng)明確未開封的試劑實(shí)際儲(chǔ)存條件及有效期，如試劑盒各組分的穩(wěn)定性不一致，則應(yīng)對(duì)各組分的儲(chǔ)存條件和有效期分別進(jìn)行描述。明確開封后的待機(jī)穩(wěn)定期或開瓶穩(wěn)定期。干粉試劑應(yīng)明確復(fù)溶穩(wěn)定期。

增加“生產(chǎn)日期、使用期限或者失效日期見(jiàn)標(biāo)簽”的字樣。

注：保存溫度不應(yīng)有模糊表述，如“常溫”、“室溫”，應(yīng)直接以℃為單位；對(duì)于可以冷凍的試劑應(yīng)注明凍融次數(shù)限制。

6.【樣本要求】

應(yīng)在以下幾方面進(jìn)行說(shuō)明：

6.1適用的樣本類型。

6.2在樣本收集、處理過(guò)程中的特別注意事項(xiàng)。

6.3為保證樣本各組分穩(wěn)定所必需的抗凝劑或保護(hù)劑等。

6.4已知的干擾物。

6.5能夠保證樣本穩(wěn)定的儲(chǔ)存、處理和運(yùn)輸方法。

6.6甲氨蝶呤濃度與用藥時(shí)間相關(guān)，應(yīng)根據(jù)臨床需求盡量保證每次給藥時(shí)間及采血時(shí)間的準(zhǔn)確性。

7.【檢驗(yàn)方法】

詳細(xì)說(shuō)明實(shí)驗(yàn)操作的各個(gè)步驟及每一步驟時(shí)間和溫度要求。包括：

7.1試驗(yàn)具體操作步驟及結(jié)果計(jì)算方式。

7.2試劑配制方法、注意事項(xiàng)。

7.3試驗(yàn)條件：溫度、時(shí)間、配套使用設(shè)備信息等以及試驗(yàn)過(guò)程中的注意事項(xiàng)。液質(zhì)聯(lián)用方法學(xué)產(chǎn)品建議注明色譜分離以及質(zhì)譜檢測(cè)相關(guān)條件，包括但不限于色譜柱填料類型、洗脫原理、推薦的流動(dòng)相洗脫條件、質(zhì)譜離子化方式、監(jiān)測(cè)模式等。

7.4校準(zhǔn)：校準(zhǔn)品的使用方法、注意事項(xiàng)、校準(zhǔn)曲線的繪制。應(yīng)注明推薦的儀器校準(zhǔn)周期。

7.5質(zhì)量控制：質(zhì)控品的使用方法、對(duì)質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等，如質(zhì)控不合格應(yīng)提供相關(guān)的解決方案。

8.【參考區(qū)間】

對(duì)于未使用相應(yīng)藥物的正常人群樣本中無(wú)可檢出的特定藥物及其代謝產(chǎn)物，因此此類試劑不涉及參考區(qū)間的內(nèi)容。

企業(yè)可根據(jù)對(duì)于藥物治療范圍的研究進(jìn)行描述。由于治療范圍取決于所采用的方法學(xué)和個(gè)體患者的臨床狀態(tài)，具體的治療范圍通常不適用于目前的甲氨蝶呤檢測(cè)。

應(yīng)對(duì)用戶說(shuō)明缺乏確定的治療范圍的警告性解釋，并應(yīng)就患者差異和測(cè)試差異進(jìn)行討論。

9.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

說(shuō)明可能對(duì)試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響的因素；說(shuō)明在何種情況下需要進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)。

若超過(guò)線性區(qū)間上限的高濃度樣本可稀釋后測(cè)定，則應(yīng)說(shuō)明樣本的最大可稀釋倍數(shù)、稀釋溶液等信息并提供經(jīng)確認(rèn)的稀釋程序。

10.【檢驗(yàn)方法的局限性】

說(shuō)明檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，不能單獨(dú)作為確診或排除病例的依據(jù)；說(shuō)明可能對(duì)試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響的因素，說(shuō)明該檢驗(yàn)方法的局限性。

（六）質(zhì)量管理體系文件

 申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在申請(qǐng)注冊(cè)時(shí)提交與產(chǎn)品研制、生產(chǎn)有關(guān)的質(zhì)量管理體系相關(guān)資料。詳述產(chǎn)品的生產(chǎn)過(guò)程，提供生產(chǎn)工藝流程圖。明確甲氨蝶呤檢測(cè)試劑的產(chǎn)品反應(yīng)及檢測(cè)原理和過(guò)程，標(biāo)明主要控制點(diǎn)與項(xiàng)目及主要原材料、采購(gòu)件的來(lái)源及質(zhì)量控制方法。

如適用，應(yīng)當(dāng)提供擬核查產(chǎn)品與既往已通過(guò)核查產(chǎn)品在生產(chǎn)條件、生產(chǎn)工藝等方面的對(duì)比說(shuō)明。

三、參考文獻(xiàn)

[1]國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.體外診斷試劑分類子目錄:食品藥品監(jiān)管總局通知242號(hào)[Z].

[2]中華人民共和國(guó)國(guó)務(wù)院.醫(yī)療器械監(jiān)督管理?xiàng)l例:中華人民共和國(guó)國(guó)務(wù)院令第739號(hào)[Z].

[3]國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局.體外診斷試劑注冊(cè)與備案管理辦法:體外診斷試劑注冊(cè)與備案管理辦法國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局令第48號(hào)[Z].

[4]國(guó)家藥品監(jiān)督管理局:醫(yī)療器械注冊(cè)申報(bào)資料和批準(zhǔn)證明文件格式要求:國(guó)家藥監(jiān)局公告2021年第121號(hào)[Z].

[5]GB/T 42062,醫(yī)療器械風(fēng)險(xiǎn)管理對(duì)醫(yī)療器械的應(yīng)用[S].

[6]國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.體外診斷試劑安全和性能基本原則清單:國(guó)家藥監(jiān)局公告2021年第122號(hào)[Z].

[7]國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.醫(yī)療器械注冊(cè)自檢管理規(guī)定:國(guó)家藥監(jiān)局公告2021年第126號(hào)[Z].

[8]國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.醫(yī)療器械說(shuō)明書和標(biāo)簽管理規(guī)定:國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第6號(hào)[Z].

[9]國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.體外診斷試劑分類規(guī)則:國(guó)家藥監(jiān)局公告2021年第129號(hào)[Z].

[10]國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則:國(guó)家藥監(jiān)局公告2022年第8號(hào)[Z].

[11]國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.免于臨床試驗(yàn)體外診斷試劑目錄:國(guó)家藥監(jiān)局通告2021年第70號(hào)[Z].

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[13]國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則:國(guó)家藥監(jiān)局通告2021年第72號(hào)[Z].

[14]國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.體外診斷試劑說(shuō)明書編寫指導(dǎo)原則:食品藥品監(jiān)管總局通告2014年第17號(hào)[Z].

[15]國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式:國(guó)家藥監(jiān)局公告2021年第122號(hào)[Z].

[16]Song Z, Hu Y, Liu S, et al. Medication therapy of high‐dose methotrexate: An evidence‐based practice guideline of the Division of Therapeutic Drug Monitoring, Chinese Pharmacological Society[J]. British Journal of Clinical Pharmacology, 2022, 88(5):2456-2472.

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