附件：腫瘤標(biāo)志物類定量檢測試劑注冊審查指導(dǎo)原則（2023年修訂版）（2024年第1號(hào)）.doc

腫瘤標(biāo)志物類定量檢測試劑注冊審查
指導(dǎo)原則（2023年修訂版）

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對腫瘤標(biāo)志物類定量檢測試劑注冊申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評部門提供參考。

本指導(dǎo)原則是對腫瘤標(biāo)志物類定量檢測試劑的一般要求，注冊申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用。若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供注冊申請人和技術(shù)審評人員使用的指導(dǎo)性文件，但不包括審評審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

腫瘤標(biāo)志物類定量檢測試劑是指利用各種方法學(xué)對人血清、血漿或其他體液中的腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行體外定量分析的試劑。

從方法學(xué)考慮，本指導(dǎo)原則主要指利用基于抗原抗體反應(yīng)原理的免疫學(xué)方法對腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行定量檢測的體外診斷試劑，如酶聯(lián)免疫法、化學(xué)發(fā)光法等，而不包括組織受體檢測、生物化學(xué)方法、免疫組化染色法、分子生物學(xué)方法類檢測試劑，有利之處可參考執(zhí)行。

本指導(dǎo)原則僅適用于對惡性腫瘤患者進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測以輔助判斷疾病進(jìn)程或治療效果的定量檢測試劑注冊申請和變更注冊申請的情形，如產(chǎn)品用于其它用途,應(yīng)根據(jù)相關(guān)用途開展相關(guān)臨床研究。本指導(dǎo)原則針對腫瘤標(biāo)志物類定量檢測試劑注冊申報(bào)資料中的部分內(nèi)容進(jìn)行撰寫，其他未盡事宜應(yīng)當(dāng)符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》等相關(guān)法規(guī)要求。

二、注冊審查要點(diǎn)

（一）監(jiān)管信息

1.產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品名稱應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》及相關(guān)法規(guī)的要求，如甲胎蛋白檢測試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法）。

2.分類依據(jù)

根據(jù)《6840體外診斷試劑分類子目錄(2013版)》《體外診斷試劑分類規(guī)則》《國家藥監(jiān)局關(guān)于調(diào)整

3.其他信息還包括產(chǎn)品列表、關(guān)聯(lián)文件、申報(bào)前與監(jiān)管機(jī)構(gòu)的聯(lián)系情況和溝通記錄以及符合性聲明等文件。

（二）綜述資料

綜述資料主要包括概述、產(chǎn)品描述、預(yù)期用途、申報(bào)產(chǎn)品上市歷史及其他需說明的內(nèi)容。建議申請人對以下幾方面內(nèi)容進(jìn)行著重介紹：

1.概述

明確腫瘤標(biāo)志物類定量檢測試劑的通用名稱及確認(rèn)依據(jù)，明確產(chǎn)品的管理類別及分類編碼。

2.產(chǎn)品描述

詳述檢測原理、產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價(jià)、與同類和/或前代產(chǎn)品的比較等。與同類和/或前代產(chǎn)品的比較，應(yīng)著重從方法學(xué)、檢驗(yàn)原理、產(chǎn)品主要性能等方面詳細(xì)說明申報(bào)產(chǎn)品與目前市場上已獲批同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。

3.預(yù)期用途

詳述申報(bào)產(chǎn)品的預(yù)期用途，應(yīng)與管理類別具有一致性。

（三）非臨床資料

1.產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗(yàn)報(bào)告

1.1產(chǎn)品技術(shù)要求

注冊申請人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、前期評價(jià)等結(jié)果，依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)資料，結(jié)合產(chǎn)品特性按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的要求編寫。作為第三類體外診斷試劑管理的腫瘤標(biāo)志物類定量檢測試劑，還應(yīng)當(dāng)以附錄形式明確主要原材料以及生產(chǎn)工藝要求。

1.2檢驗(yàn)報(bào)告

有適用國家標(biāo)準(zhǔn)品的，技術(shù)要求中應(yīng)體現(xiàn)國家標(biāo)準(zhǔn)品的相關(guān)要求并使用國家標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行檢驗(yàn)。

第三類體外診斷試劑應(yīng)當(dāng)提供三個(gè)不同生產(chǎn)批次產(chǎn)品的檢驗(yàn)報(bào)告。

2.分析性能研究

注冊申請人應(yīng)采用在符合質(zhì)量管理體系的環(huán)境下生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行所有分析性能研究，包括具體研究方法、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)方法等詳細(xì)資料。分析性能研究試驗(yàn)方法可參考《定量檢測體外診斷試劑分析性能評估注冊審查指導(dǎo)原則》、美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)批準(zhǔn)指南（CLSI-EP）等國內(nèi)外有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的指導(dǎo)原則進(jìn)行。

腫瘤標(biāo)志物類定量檢測試劑的分析性能一般包括樣本穩(wěn)定性，適用的樣本類型，校準(zhǔn)品的量值溯源和質(zhì)控品的賦值，正確度，精密度，空白限、檢出限及定量限，分析特異性，高劑量鉤狀效應(yīng)，測量區(qū)間及可報(bào)告區(qū)間，反應(yīng)體系等。產(chǎn)品的準(zhǔn)確度與正確度和精密度有關(guān)。申請人應(yīng)設(shè)計(jì)合理的試驗(yàn)方案，對各項(xiàng)分析性能進(jìn)行充分評估。

2.1樣本穩(wěn)定性

樣本穩(wěn)定性一般包括樣本各種實(shí)際運(yùn)輸及儲(chǔ)存（常溫、冷藏和冷凍）條件下的保存期限驗(yàn)證，以確認(rèn)樣本的保存條件及保存時(shí)間?？梢栽诤侠淼臏囟确秶鷥?nèi)，每間隔一定的時(shí)間段即對儲(chǔ)存樣本進(jìn)行驗(yàn)證，從而確認(rèn)不同類型樣本的穩(wěn)定性。可冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進(jìn)行合理驗(yàn)證。

2.2適用的樣本類型

如果試劑適用于多種樣本類型（包括抗凝劑），應(yīng)采用合理方法評價(jià)每種樣本類型的適用性。對具有可比性的樣本類型，如血清和血漿樣本，可選擇具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義數(shù)量的樣本進(jìn)行樣本一致性的同源比對研究；對于不具有可比性的樣本類型，應(yīng)對每種樣本類型分別進(jìn)行分析性能評估。

如果樣本的采集、處理方式存在差別，例如適用不同采樣器、不同樣本保存液等處理方法，應(yīng)分析這些差別的潛在影響，并進(jìn)行針對性的分析性能驗(yàn)證。

2.3校準(zhǔn)品的量值溯源和質(zhì)控品的賦值（如適用）

應(yīng)明確申報(bào)產(chǎn)品適用的校準(zhǔn)品和質(zhì)控品。

如申報(bào)產(chǎn)品包括校準(zhǔn)品，應(yīng)當(dāng)提交溯源資料。

如申報(bào)產(chǎn)品包括質(zhì)控品，應(yīng)當(dāng)提交在所有適用機(jī)型上進(jìn)行賦值和驗(yàn)證的資料。

2.4正確度

正確度評價(jià)方法包括使用參考物質(zhì)的正確度評價(jià)、方法學(xué)比對、回收試驗(yàn)等方法，企業(yè)可根據(jù)實(shí)際情況選擇合理方法進(jìn)行研究。

2.4.1使用參考物質(zhì)的正確度評價(jià)

參考物質(zhì)的值可作為參考量值，用于評估試劑檢測結(jié)果的偏倚。推薦的參考物質(zhì)包括：具有互換性的有證參考物質(zhì)，公認(rèn)的參考品、標(biāo)準(zhǔn)品，參考測量程序賦值的臨床樣本。不可采用產(chǎn)品校準(zhǔn)品、申報(bào)試劑檢測系統(tǒng)定值的質(zhì)控品進(jìn)行正確度評價(jià)。

建議采用2～3個(gè)水平的參考物質(zhì)，代表試劑測量區(qū)間內(nèi)的不同濃度，其中應(yīng)包括參考區(qū)間上限附近的濃度。進(jìn)行多次重復(fù)檢測，采用檢測結(jié)果平均值與參考量值計(jì)算偏倚。如參考物質(zhì)只有1個(gè)水平，且無合理稀釋方法，亦可在說明原因的基礎(chǔ)上，僅采用1個(gè)水平的參考物質(zhì)進(jìn)行正確度評價(jià)。

2.4.2方法學(xué)比對

采用申報(bào)試劑與合理的比較測量程序同時(shí)檢測臨床樣本，通過兩者的比對研究和偏倚估計(jì)，進(jìn)行申報(bào)試劑的正確度評價(jià)。比較測量程序可選擇同類試劑或者參考測量程序。臨床樣本的濃度水平應(yīng)覆蓋申報(bào)試劑的測量區(qū)間。在性能建立時(shí)，建議對每個(gè)樣本重復(fù)檢測，以平均值或中位數(shù)進(jìn)行回歸分析，并評價(jià)參考區(qū)間上限濃度的偏倚。在實(shí)施方法學(xué)比對前，應(yīng)分別對申報(bào)試劑和比較測量程序進(jìn)行初步評估，只有在確認(rèn)兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后方可進(jìn)行比對試驗(yàn)。

2.4.3回收試驗(yàn)

對于缺少具有互換性的有證參考物質(zhì)，公認(rèn)的參考品、標(biāo)準(zhǔn)品，及參考測量程序，且無已上市同類試劑，同時(shí)可獲得與被測量一致的純品的試劑，可采用回收試驗(yàn)進(jìn)行正確度評價(jià)。

使用純品配制標(biāo)準(zhǔn)溶液A時(shí)，宜采用重量法，以減小配制過程中的不確定度。應(yīng)注意基質(zhì)效應(yīng)，盡量采用與臨床待測樣本接近的基質(zhì)。選擇合適濃度的臨床樣本作為B液。將不同體積量的標(biāo)準(zhǔn)溶液A加入樣本B中，配制成至少3個(gè)不同濃度的回收樣品，每個(gè)濃度重復(fù)檢測3次，計(jì)算平均回收率。

需注意，一般標(biāo)準(zhǔn)溶液的加入體積不超過總體積的10%。至少一份回收樣本的分析物濃度在參考區(qū)間上限附近。

2.5精密度

應(yīng)根據(jù)各測量條件對檢測結(jié)果影響程度的分析，設(shè)計(jì)合理的精密度試驗(yàn)方案進(jìn)行評價(jià)，包括重復(fù)性、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)精密度、實(shí)驗(yàn)室間精密度和批間精密度，應(yīng)制定合理的精密度評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)等。

精密度研究用樣本一般為臨床實(shí)際檢測樣本或其混合物。樣本濃度一般包括測量區(qū)間高、中、低在內(nèi)的3～5個(gè)水平，應(yīng)有參考區(qū)間上限濃度附近的樣本。

2.6空白限、檢出限及定量限

腫瘤標(biāo)志物定量檢測體外診斷試劑對樣本濃度下限的檢出能力指標(biāo)包括空白限（LoB）、檢出限（LoD）及定量限（LoQ）。

2.6.1空白限、檢出限及定量限的建立

LoB、LoD、LoQ的建立需分別選擇多個(gè)獨(dú)立的樣本（空白樣本、低濃度水平樣本、已知濃度的低水平樣本），在多天內(nèi)進(jìn)行研究。

LoB一般由多個(gè)獨(dú)立的空白樣本（無分析物）的檢測結(jié)果計(jì)算獲得。

LoD一般由多個(gè)獨(dú)立的低濃度（含有分析物）樣本的檢測結(jié)果，結(jié)合LoB進(jìn)行計(jì)算獲得。

應(yīng)根據(jù)具體產(chǎn)品的原理、檢測結(jié)果差異和數(shù)據(jù)分布，選擇合理的試驗(yàn)方案和統(tǒng)計(jì)分析方法。

LoQ應(yīng)滿足預(yù)設(shè)準(zhǔn)確度指標(biāo)，即考慮偏倚和精密度的要求。偏倚可通過檢測具有可接受參考量值的樣本進(jìn)行評估，所以需獲得已知濃度的低水平樣本，例如本文2.4.1中所述參考物質(zhì)。如涉及將樣本稀釋至低濃度水平，應(yīng)確保稀釋過程不引起明顯的基質(zhì)效應(yīng)，且在低濃度區(qū)間呈線性。精密度的評估可根據(jù)檢測試劑及其應(yīng)用確定其測量條件，一般應(yīng)至少包括重復(fù)性和日間精密度。

對于無法獲得參考物質(zhì)的腫瘤標(biāo)志物，如無法在合適的低水平分析物濃度下確定偏倚，可采用其他合理的替代方法評估LoQ，例如研究試劑精密度達(dá)到特定要求時(shí)的最低分析物濃度。建議僅在無法確定偏倚時(shí)采用替代方法，并且應(yīng)設(shè)置較為嚴(yán)格的精密度要求。

2.6.2空白限、檢出限及定量限的驗(yàn)證

LoB、LoD、LoQ的驗(yàn)證需各選擇至少2個(gè)樣本（空白樣本、檢出限濃度樣本、定量限濃度樣本），在多天內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)。每個(gè)試劑批次至少需要獲得20個(gè)檢測結(jié)果，計(jì)算符合要求的檢測結(jié)果比例，如果比例符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求/預(yù)設(shè)的臨界值，則2.6.1建立的LoB、LoD、LoQ得到驗(yàn)證。企業(yè)可參考相關(guān)文件，根據(jù)申報(bào)產(chǎn)品特性制定檢測結(jié)果比例要求。一般來講，LoB總是低于LoD，而LoD則低于或等于LoQ。

2.7分析特異性

分析特異性受干擾和交叉反應(yīng)的影響。申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn),分析待測樣本中及試劑使用過程中潛在的干擾物質(zhì)和交叉反應(yīng)物質(zhì)。

2.7.1干擾試驗(yàn)

可采用添加干擾物質(zhì)的樣本進(jìn)行研究，如果干擾物質(zhì)的基質(zhì)與適用樣本不同，則添加量宜少于總體積的5%（溶解度允許條件下），并盡量使用接近體內(nèi)循環(huán)形式的樣品或純品。

比較添加與未添加高濃度干擾物質(zhì)的樣本檢測結(jié)果的差異。如果差異超出接受范圍或?qū)εR床有顯著性影響，可確認(rèn)該物質(zhì)為干擾物質(zhì)，應(yīng)評估該干擾物質(zhì)濃度與干擾程度之間的關(guān)系；如果差異在接受范圍內(nèi)或?qū)εR床無顯著性影響，可認(rèn)為該濃度的物質(zhì)不產(chǎn)生干擾，應(yīng)明確不產(chǎn)生干擾的物質(zhì)濃度上限。

在對可疑干擾物質(zhì)進(jìn)行干擾篩查或驗(yàn)證時(shí)，建議采用至少2個(gè)分析物水平的樣本，應(yīng)包括參考區(qū)間上限附近濃度的樣本。

在評估干擾物質(zhì)濃度與干擾程度之間關(guān)系時(shí)，可適當(dāng)增加樣本數(shù)量，納入更多分析物水平的樣本。

申請人除按照上述方法采用添加干擾物質(zhì)的樣本進(jìn)行研究外，亦可采用有代表性的患者樣本，通過申報(bào)試劑與不受該干擾物影響的測量程序檢測結(jié)果間的比對，進(jìn)行干擾物質(zhì)研究。

常見的內(nèi)源性干擾物質(zhì)包括溶血（血紅蛋白）、高脂、高膽紅素、自身抗體(如RF、ANA)、生物素、人抗鼠抗體，近期使用的抗腫瘤藥物（如某些生物制劑），應(yīng)研究其對檢測結(jié)果的影響。

2.7.2交叉反應(yīng)

建議選擇高濃度的交叉反應(yīng)物質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證，并應(yīng)提供用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證物質(zhì)的來源、制備、濃度等基本信息。

常見的交叉反應(yīng)物質(zhì)包括樣本中存在的某些與待測抗原有相似化學(xué)結(jié)構(gòu)或抗原表位的分子，可能與試劑中的單克隆抗體發(fā)生交叉反應(yīng)而影響檢測結(jié)果的物質(zhì)，如易共存的其他腫瘤標(biāo)志物抗原、某些激素等，可根據(jù)產(chǎn)品特性，選擇交叉物質(zhì)進(jìn)行研究。

企業(yè)可自行根據(jù)產(chǎn)品原理，選擇與申報(bào)產(chǎn)品臨床適應(yīng)證相關(guān)的藥物進(jìn)行研究，如可能與分析物發(fā)生作用的藥物、影響反應(yīng)體系的藥物等。

2.8高劑量鉤狀效應(yīng)

檢測含有極高濃度的待測抗體/抗原的樣本時(shí)，飽和反應(yīng)可能導(dǎo)致檢測濃度值低于真實(shí)值。建議對多個(gè)含有高濃度分析物的樣本進(jìn)行梯度稀釋后由低濃度至高濃度檢測，每個(gè)梯度的稀釋液重復(fù)多份進(jìn)行檢測，明確不產(chǎn)生鉤狀效應(yīng)的最高分析物濃度。

2.9測量區(qū)間及可報(bào)告區(qū)間

2.9.1線性區(qū)間及測量區(qū)間

線性區(qū)間的研究，需采用高值和零濃度/低值樣本配制一系列不同濃度的樣本。樣本基質(zhì)應(yīng)盡可能與臨床實(shí)際檢測的樣本相似，理想的樣本為分析物濃度接近預(yù)期測定上限的混合人體樣本，且應(yīng)充分考慮多倍稀釋對樣本基質(zhì)的影響。

當(dāng)建立試劑的線性區(qū)間時(shí)，需配制較預(yù)期線性區(qū)間更寬的9個(gè)左右不同濃度的樣本（不包括零濃度樣本），每個(gè)樣本進(jìn)行多次重復(fù)檢測，根據(jù)可接受線性偏差和各濃度的重復(fù)性，確定檢測次數(shù)。采用重復(fù)檢測均值和預(yù)期值進(jìn)行直線回歸分析，建議采用加權(quán)最小二乘回歸等分析方法，提供散點(diǎn)圖、線性回歸方程、線性相關(guān)系數(shù)（r）及線性偏差，判斷結(jié)果是否滿足可接受標(biāo)準(zhǔn)。

當(dāng)驗(yàn)證試劑的線性區(qū)間時(shí)，需配制覆蓋整個(gè)線性區(qū)間的至少5個(gè)不同濃度的樣本，每個(gè)樣本至少重復(fù)檢測2次。

測量區(qū)間，也稱分析測量區(qū)間，在該區(qū)間內(nèi)，臨床樣本在未經(jīng)稀釋、濃縮，或非常規(guī)測量程序中步驟的其他前處理情況下，檢測結(jié)果的線性偏差、不精密度和偏倚均在可接受范圍內(nèi)。測量區(qū)間下限為定量限，線性區(qū)間包含測量區(qū)間。

2.9.2可報(bào)告區(qū)間

如對超出測量區(qū)間濃度的樣本可進(jìn)行稀釋后檢測，應(yīng)研究合適的稀釋液和稀釋倍數(shù)，從而確定試劑的可報(bào)告區(qū)間。

2.10其他需注意問題

如果試劑適用不同的機(jī)型，需要在不同機(jī)型上分別進(jìn)行分析性能評估。應(yīng)采用一個(gè)或多個(gè)機(jī)型，進(jìn)行充分的試劑分析性能建立研究，對于其他機(jī)型，應(yīng)分析各適用機(jī)型的工作原理、檢測方法、反應(yīng)條件控制、信號(hào)處理等，如基本相同，可基于風(fēng)險(xiǎn)分析對已建立的分析性能指標(biāo)進(jìn)行合理驗(yàn)證。所有適用機(jī)型驗(yàn)證的分析性能應(yīng)基本一致，如不同機(jī)型對某一檢測項(xiàng)目的某一分析性能存在差異，應(yīng)針對該差異采用不同機(jī)型進(jìn)行充分的分析性能建立研究。

2.11反應(yīng)體系研究

管理類別為第三類的腫瘤標(biāo)志物定量檢測試劑應(yīng)提交反應(yīng)體系研究資料，第二類試劑由申請人保存，技術(shù)審評需要時(shí)應(yīng)提交。

2.11.1確定抗原抗體反應(yīng)條件（溫度、時(shí)間等）的研究資料。

2.11.2確定反應(yīng)所需物質(zhì)用量（校準(zhǔn)品、樣本、包被物、酶標(biāo)物、底物等）的研究資料；如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進(jìn)行處理后方可用于最終檢測，申請人還應(yīng)對樣本稀釋液及其用量、其他必要的處理方法等進(jìn)行研究。

2.11.3底物（發(fā)光或變色）的最適條件研究。

2.11.4其他：如清洗次數(shù)（如適用）、基質(zhì)液的選擇、樣本稀釋等。

2.11.5不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述。

3.穩(wěn)定性研究

穩(wěn)定性研究主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（貨架有效期）、使用穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性等，申請人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體方法及過程。對于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少3批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

4.參考區(qū)間研究

詳述參考區(qū)間建立或驗(yàn)證的方法或依據(jù)，明確研究采用的樣本來源及信息、詳細(xì)的試驗(yàn)資料、統(tǒng)計(jì)方法等。樣本選擇應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的預(yù)期用途，考慮不同年齡、性別、地域等因素的影響，盡可能考慮樣本來源的多樣性、代表性。使用適用的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法確定擬申報(bào)試劑的參考區(qū)間，可參考《體外診斷試劑參考區(qū)間確定注冊審查指導(dǎo)原則》進(jìn)行研究。

5.其他資料

管理類別為第三類的腫瘤標(biāo)志物定量檢測試劑應(yīng)提交主要原材料及生產(chǎn)工藝研究資料，第二類試劑由申請人保存，技術(shù)審評需要時(shí)應(yīng)提交。

5.1主要原材料研究資料

此類產(chǎn)品的主要原材料研究包括抗原、抗體、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品等資料，應(yīng)提供主要原材料的選擇與來源、制備、質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)等相關(guān)研究資料。

5.1.1抗原或抗體

詳述抗原/抗體所針對的抗原表位、抗原/抗體制備所用免疫原以及確定該抗原/抗體作為主要原材料的依據(jù)，提交抗原/抗體來源、制備、篩選、鑒定及質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)（可包括外觀、蛋白濃度、純度、分子量、效價(jià)、功能性試驗(yàn)等）等詳細(xì)試驗(yàn)資料。

5.1.2其他

除上述原材料外，產(chǎn)品中包含的其他原材料，如磁微粒、BSA等，均應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證并提交相關(guān)資料。明確供應(yīng)商和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

5.1.3對于校準(zhǔn)品、質(zhì)控品，還應(yīng)列明校準(zhǔn)品、質(zhì)控品的成分、基質(zhì)及各水平濃度。

5.2生產(chǎn)工藝研究資料

5.2.1主要生產(chǎn)工藝介紹，可以圖表方式表示。

5.2.2反應(yīng)原理（如雙抗體夾心法）介紹。

5.2.3固相載體的包被、顯色（發(fā)光）系統(tǒng)的確定、結(jié)合物的制備等研究資料。

（四）臨床評價(jià)資料

屬于《免于臨床試驗(yàn)體外診斷試劑目錄》的腫瘤標(biāo)志物定量檢測試劑，可通過同品種方法學(xué)比對研究進(jìn)行臨床評價(jià)，評價(jià)方法可參照《免于臨床試驗(yàn)的體外診斷試劑臨床評價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則》相關(guān)內(nèi)容，如相關(guān)法規(guī)、文件有更新，臨床評價(jià)應(yīng)符合更新后的要求。

不屬于《免于臨床試驗(yàn)體外診斷試劑目錄》的腫瘤標(biāo)志物定量檢測試劑，應(yīng)通過臨床試驗(yàn)方式進(jìn)行臨床評價(jià)，臨床評價(jià)資料應(yīng)符合《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求。

對于有已上市同類產(chǎn)品的臨床試驗(yàn)，應(yīng)選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為對比試劑，進(jìn)行試驗(yàn)體外診斷試劑與對比試劑的比對研究，證明與已上市產(chǎn)品的一致性。臨床研究的受試人群應(yīng)為該產(chǎn)品的預(yù)期人群，具有與該標(biāo)志物相關(guān)惡性腫瘤的臨床背景信息。對于定量檢測，應(yīng)針對主要評價(jià)指標(biāo)進(jìn)行樣本量估算。臨床試驗(yàn)方案中建議同時(shí)給出與所選定評價(jià)指標(biāo)對應(yīng)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)，并提供確定依據(jù)。在線性范圍內(nèi)的各個(gè)濃度水平均應(yīng)有一定量的入組樣本例數(shù)。定量檢測的體外診斷試劑臨床試驗(yàn)評價(jià)指標(biāo)通常包括回歸分析的回歸系數(shù)、截距、相關(guān)系數(shù)和決定系數(shù)等。采用Bland-Altman法，計(jì)算一致性限度，評價(jià)兩種檢測結(jié)果的一致性。一致性限度應(yīng)在臨床所能接受的界值范圍內(nèi)。

對于全新腫瘤標(biāo)志物定量檢測的臨床試驗(yàn)，應(yīng)包含不少于100例受試者的縱向研究，建議參考《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》進(jìn)行研究。

（五）產(chǎn)品說明書和標(biāo)簽樣稿

產(chǎn)品說明書格式應(yīng)滿足《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求。產(chǎn)品說明書中技術(shù)內(nèi)容應(yīng)與注冊申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，應(yīng)以規(guī)范格式進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。腫瘤標(biāo)志物定量檢測試劑說明書編寫應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注以下內(nèi)容：

1.【預(yù)期用途】

1.1首段明確申報(bào)產(chǎn)品用于體外定量檢測血清、血漿和/或其他體液中的某腫瘤標(biāo)志物濃度，主要用于對惡性腫瘤患者進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測以輔助判斷疾病進(jìn)程或治療效果，不能作為惡性腫瘤早期診斷或確診的依據(jù)，不用于普通人群的腫瘤篩查。

1.2簡單介紹該腫瘤標(biāo)志物的特征，如分子結(jié)構(gòu)、分子量、產(chǎn)生和代謝主要途徑、半衰期等。

1.3腫瘤標(biāo)志物水平升高常見于哪些良惡性疾病，組織/器官特異性如何，其升高或降低可能有哪些醫(yī)學(xué)解釋。

1.4預(yù)期用途項(xiàng)下的背景信息應(yīng)與預(yù)期用途一致，如申報(bào)產(chǎn)品預(yù)期用途不包含“診斷”“篩查”用途，則不得出現(xiàn)“診斷”“篩查”等誤導(dǎo)性表述。

2.【主要組成成分】

2.1說明試劑盒包含組分的名稱、數(shù)量及各組分主要成分的比例或濃度等信息，如果對于正確的操作很重要，應(yīng)提供其生物學(xué)來源、活性及其他特性；如適用，明確說明不同批號(hào)試劑盒中各組分是否可以互換。

2.2試劑盒內(nèi)如包含校準(zhǔn)品和/或質(zhì)控品，應(yīng)說明其主要組成成分及其生物學(xué)來源，校準(zhǔn)品應(yīng)注明其定值及溯源性，質(zhì)控品應(yīng)有合適的靶值范圍，如靶值范圍為批特異，可注明批特異，并附單獨(dú)的靶值。

2.3試劑盒中不包含但對該項(xiàng)檢測必須的組分，企業(yè)應(yīng)列出相關(guān)試劑的名稱、貨號(hào)及其他相關(guān)信息。

3.【樣本要求】

重點(diǎn)明確以下內(nèi)容：樣本類型、處理、保存期限、保存條件（短期、長期）等。如有血漿樣本，應(yīng)注明對抗凝劑的要求。冷藏/冷凍樣本檢測前是否需恢復(fù)室溫，凍融次數(shù)。應(yīng)詳細(xì)描述對特殊體液標(biāo)本的采集條件、保存液、容器等可能影響檢測結(jié)果的要求。

4.【適用機(jī)型】

說明適用的儀器及其型號(hào)，并提供與儀器有關(guān)的信息以便用戶能夠正確選擇使用。

5.【檢驗(yàn)方法】

詳細(xì)說明試驗(yàn)操作的各個(gè)步驟，包括：

5.1試劑使用方式、注意事項(xiàng)。

5.2試驗(yàn)條件：溫度、時(shí)間、儀器波長等以及試驗(yàn)過程中的注意事項(xiàng)。

5.3校準(zhǔn)：校準(zhǔn)品的使用方法、注意事項(xiàng)、校準(zhǔn)曲線的繪制（如適用）。

對需專用儀器的產(chǎn)品，應(yīng)注明推薦的儀器校準(zhǔn)周期。

5.4質(zhì)量控制：質(zhì)控品的使用方法、對質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等；建議在本部分注明以下字樣：如果質(zhì)控結(jié)果與預(yù)期不符，提示檢測結(jié)果不可靠，不應(yīng)出具檢測報(bào)告。如質(zhì)控不合格應(yīng)提供相關(guān)的解決方案。

6.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】詳述以下性能指標(biāo)：

6.1空白限、檢出限和定量限：明確空白限、檢出限和定量限，簡要介紹確定方法。

6.2測量區(qū)間：說明本試劑盒可達(dá)到的線性區(qū)間、測量區(qū)間或可報(bào)告區(qū)間，儀器報(bào)告結(jié)果的高限和低限要求（如有）等。

6.3精密度：簡要說明精密度評價(jià)的方法和結(jié)果。

6.4特異性：明確有關(guān)干擾或交叉反應(yīng)的研究結(jié)果。常見的特異性研究包括：對溶血、高脂、黃疸等干擾因子研究（結(jié)果應(yīng)量化表示，禁用輕度、嚴(yán)重等模糊表述），有關(guān)自身抗體、易共存或結(jié)構(gòu)相似的不同腫瘤標(biāo)志物間、抗腫瘤藥物特異性（如某些生物制劑）的研究等，如未進(jìn)行相關(guān)研究也應(yīng)提供相關(guān)警示說明。

6.5鉤狀效應(yīng)：說明不會(huì)產(chǎn)生鉤狀效應(yīng)的濃度上限或相關(guān)研究，如需稀釋，應(yīng)注明對稀釋液的要求、最佳或最大稀釋比例。

6.6正確度：簡要介紹正確度所采用的方法和結(jié)果。

6.7概括描述臨床評價(jià)（包括免于臨床試驗(yàn)的臨床評價(jià)和臨床試驗(yàn)）的方法和結(jié)果。

6.8建議采用國際標(biāo)準(zhǔn)濃度單位表示腫瘤標(biāo)志物濃度，如涉及不同單位，如U/mL、ng/mL、mg/L等，應(yīng)注明不同單位間的換算關(guān)系。

7.【參考區(qū)間】

應(yīng)注明常用樣本類型的參考區(qū)間，簡單介紹建立和/或驗(yàn)證該參考區(qū)間所選健康人群的基本信息，包括：樣本量、參考人群特征（如性別、年齡、種族等）和采用的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法。建議注明以下字樣“由于地理、人種、性別及年齡等差異，建議各實(shí)驗(yàn)室建立自己的參考區(qū)間”。

8.【注意事項(xiàng)】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

8.1本試劑盒的檢測結(jié)果僅供臨床參考，對患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。

8.2由于方法學(xué)或抗體特異性等原因，使用不同生產(chǎn)商的試劑對同一份樣本進(jìn)行腫瘤標(biāo)志物檢測可能會(huì)得到不同的檢測結(jié)果，因此，在腫瘤監(jiān)測過程中，用不同試劑檢測所得結(jié)果不應(yīng)直接相互比較，以免造成錯(cuò)誤的醫(yī)學(xué)解釋；建議實(shí)驗(yàn)室在發(fā)給臨床醫(yī)生的檢測報(bào)告中注明所用試劑特征。系列監(jiān)測中如果改變試劑類型，則應(yīng)進(jìn)行額外的連續(xù)性檢測并與原有試劑結(jié)果進(jìn)行平行比較以重新確定基線值。

8.3有關(guān)人源組分的警告，如：試劑盒內(nèi)的質(zhì)控品、校準(zhǔn)品或其他人源組分，雖已經(jīng)通過了HBs-Ag、HIV1/2-Ab、HCV-Ab等項(xiàng)目的檢測，但截至目前，沒有任何一項(xiàng)檢測可以確保絕對安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對待。

8.4樣本：對所有樣本和反應(yīng)廢棄物都應(yīng)視為傳染源對待。

8.5其他有關(guān)不同腫瘤標(biāo)志物特性的注意事項(xiàng)。

三、名詞解釋

1.腫瘤標(biāo)志物：是指在惡性腫瘤發(fā)生和增殖過程中,由腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生或機(jī)體反應(yīng)而異常產(chǎn)生和/或升高的，反映腫瘤細(xì)胞特性的一類物質(zhì)。

2.正確度：指無窮多次重復(fù)測量所得量值的平均值與一個(gè)參考量值間的一致程度。

3.精密度：在規(guī)定條件下，相互獨(dú)立的測試結(jié)果之間的一致程度。精密度的程度是用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法得到的測量不精密度的數(shù)字形式表示，如標(biāo)準(zhǔn)差（SD）和變異系數(shù)（CV）。

4.空白限：指測量空白樣本時(shí)可能觀察到的最高測量結(jié)果。

5.檢出限：由給定測量程序得到的測得量值，對于此值，在給定聲稱物質(zhì)中存在某成分的誤判概率為α?xí)r，聲稱不存在該成分的誤判概率為β。

6.定量限：指達(dá)到預(yù)設(shè)準(zhǔn)確度要求時(shí)可測量的最低分析物濃度。

7.線性：指給出與樣品中被測量的值直接成比例的測得量值的能力。

8.線性區(qū)間：在這個(gè)區(qū)間內(nèi)，測量結(jié)果充分地符合一條合適的直線。

9.干擾：是由一個(gè)影響量引起的測量的系統(tǒng)效應(yīng)，該影響量自身不在測量系統(tǒng)中產(chǎn)生信號(hào)，但它會(huì)引起示值的增加或減少。

10.交叉反應(yīng)：指不是分析物的物質(zhì)與試劑反應(yīng)的程度。

11.高劑量鉤狀效應(yīng)：是指在免疫化學(xué)測量程序中由相對抗體濃度抗原濃度過量或相對抗原濃度抗體濃度過量時(shí)的抗原-抗體免疫復(fù)合物減少而引起的負(fù)偏倚。

四、參考文獻(xiàn)

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[3]國家藥品監(jiān)督管理局.關(guān)于發(fā)布免于臨床試驗(yàn)體外診斷試劑目錄的通告.國家藥品監(jiān)督管理局公告2021年第74號(hào)[Z].

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